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梯度實驗常見的問題與解決方案
點擊次數(shù)：2193 發(fā)布時間：2019-09-18
梯度實驗常見的問題與解決方案
*，做HPLC分析時梯度系統(tǒng)可以在縮短分析時間的同時而不影響樣品的分離，但是簡便的同時也伴隨著多種多樣的問題，就筆者個人總結，常見的問題有三點：
（1）兩相混合后產(chǎn)生氣泡
緩沖鹽溶液與純甲醇走梯度產(chǎn)生的氣泡圖，對此我們公司通常的解決方法是使用“反壓調(diào)節(jié)器”使紫外檢測池有一定的壓力，阻止氣泡形成。其次通常我們不建議使用純的有機相如純甲醇，純乙腈作流動相。
（2）梯度基線漂移問題
此問題一般發(fā)生在梯度線形變化的時候，而在低波長下基本不可避免。因為色譜常用的甲醇和乙腈在低波長（如210nm）下是有吸收的，如果基線隨著有機相不斷增多而上漂或者隨著有機相的不斷減少而下漂，這不僅是正常現(xiàn)象，還反映了系統(tǒng)的靈敏性和性。所以這個問題無法消除，只能通過選擇更的有機溶劑來降低基線漂移的程度，如乙腈的工業(yè)污染物為丙酮（有的紫外吸收），選擇更的乙腈可以地降低梯度漂移的程度。
（3）梯度鬼峰
這個問題可以一分為二，梯度鬼峰有偶然情況和必然情況兩種。
偶然情況為流動相未經(jīng)良好脫氣，溶解氧能與某些有機溶劑形成有紫外吸收的絡合物，而出現(xiàn)的吸收，此種情況沒有重復性，可以通過良好的流動相脫氣而避免。
可能還有些問題這里未能總結，得通過化學工作者不斷去發(fā)現(xiàn)和總結，遇到問題解決問題是化學工作者的基本工作，實事求是是化學工作的基本要求。
必然情況即隨著梯度運行形成一些莫名其妙的峰，并且有*的重復性，不可避免，一般發(fā)生在梯度有大的變化的時候。遇到這樣的情況不要擔心，做一個梯度空白對照，只要梯度鬼峰不影響樣品的出峰即可。
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